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BIM试剂盒带您回首11月新客户问题汇总

发布日期:2017/11/23 11:20:50 阅读次数:373次

新客户1:我看别人洗板时,用500ml瓶接输液器直接滴满,然后倒掉,洗板,会不会因为满了滴到其他孔,造成相互干扰。3%BSA不能高压,用蒸馏水稀释溶解后需要过滤吗?我的预实验先用方正棋盘法一次摸索一抗,二抗的浓度,而HRP-Avidin先用他的说明书:1:10000 或1:5000可以吗?再次预实验则固定一抗,二抗浓度,HRP-Aaidin浓度作一系列稀释,确定HRP-Aaidin浓度,对吗?阳性阴性值怎么确定?有的用S/P>=2.1,或大于阴性对照OD值的2.1倍,或阴性对照OD值+-2SD,到底那个对?我是双抗体夹心测抗原,无标准品。谢谢!
上海沪鼎生物:1)如果这样洗板的话,只要*次先把孔内液体甩去,再加洗涤液即可,不容易互相干扰的。*后所有孔全部加满后,放置30-60秒再甩去,这样洗涤的更彻底。
2)BSA溶解后基本不用过滤,除非您的BSA质量不好。
3)没有标准品,那您有没有一些基本的标本,或者自己用纯化抗原稀释的质控品。您必须先对您的试剂定一个要求,比如说您希望将该抗原 1ng/ml测到0.2,那您就自制一个质控品,2ng/ml或5ng/ml都行,对应当OD就是0.4或1.0。阴性就用您被测的阴性血清。用质控品和阴性血清来摸索浓度,尽量把阳性质控品做高,阴性血清值做低。您摸浓度的过程基本可以,可以试试。
4)临界值的制定方法有很多,一般市面上定为大于阴性对照OD值的2.1倍的其实都是定值:0.105。因为如果阴性对照小于0.05的话按0.05计算。也有阴性对照加定值的(可以加0.1也可以加0.2),还有用阳性对照乘以定值的。这些都可以,关键看您的系统做阴性血清可以达到多少的值,和您的*灵敏度的值可以到多少。

新客户2:我用TMB显色15min后,加入2M硫酸100ul终止反应,然后读数。发现加入阳性血清的OD值不稳定,呈上涨的趋势,同时阴性和空白却稳定,这是什么原因呢?
上海沪鼎生物:这说明没有终止完全,降低TMB的用量。一般情况下是不会涨太多的。

新客户3:我用夹心法ELISA测细胞因子, 检测标准抗原敏感性只能到 ng/ml水平,我应该从那些方面着手来提高敏感性呢?
上海沪鼎生物:如果单用双抗体夹心法测细胞因子,ELISA灵敏度能到1ng上下,这是方法学决定的。有三种方法可以提高灵敏度:一是用发光法或荧光法,有一种发光底物可直接替代TMB,效果明显;二是用生物素亲和素放大,三是用抗抗体法即包被抗体-细胞因子-单抗-抗鼠抗体接酶。*后一种可以提高灵敏度到0.05ng。

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